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熒光定量PCR試劑盒的操作步驟,快來學習下吧

更新時間:2023-02-23      瀏覽次數:1112
 熒光定量PCR試劑盒的操作步驟:
 
  1、取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其溶解。
 
  2、兩相分離每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。
 
  3、RNA沉淀將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
 
  4、RNA清洗移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
 
  5、RNA干燥小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
 
  6、溶解RNA沉淀溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。


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