人血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒

ELISA檢測概述：

ELISA（酶聯(lián)接免疫吸附反應分析）是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗ti的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術。 由于抗原、抗ti的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩(wěn)定性。

實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗ti的間接法、用于檢測抗原的雙抗ti夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗ti夾心法及ELISA間接法服務

特點概述

1.專一性強。抗原與抗ti的免疫反應是專一反應， 而免疫酶技術以免疫反應為基礎,所檢測的對象是抗原(或抗ti)，使用的抗ti除標記了酶以外，與普通抗ti的免疫反應特性并無多大差別。

2.靈敏度高。由于抗ti聯(lián)結上了酶，因此，借助于酶與底物的顯色反應，顯示抗原與抗ti的結合，大大提高了檢測的靈敏性,使檢測水平接近放射免疫測定法。

3.樣品易保存。經(jīng)過酶反應顯示的有色產(chǎn)物大多比較穩(wěn)定，因此有利于樣品的保存。

4.結果易觀察。對檢測結果即可用肉眼觀察,又可用顯微鏡觀察,也可以用分光光度計進行比色測定,還可用顯微鏡觀察。這是因為某些酶反應產(chǎn)物能使電子密度發(fā)生改變，從而引起被檢測物的顯示。

5.可以定量測定。溶液中的抗原物質(zhì)，應用酶免吸附技術進行比色測定,依據(jù)光密度值的變化，可以定量。預計用細胞分光光度計可對組織內(nèi)的抗原進行免疫酶技術的定量測定。

6.可以大規(guī)模測定樣品。如有成千.上萬份樣品需要進行檢測，免疫酶技術都能在較短時間內(nèi)完成。

7.儀器和試劑簡單。對免疫沒技術來說，不需要熒光顯微鏡,也不需要測定放射性的特殊儀器,所用儀器及試劑均屬一般性儀器與試劑，普通實驗室及生產(chǎn)應用單位均易購置

ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法：

1）血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3）細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。

試劑盒的儲存及有效期：

未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。

使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存，開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。

穩(wěn)定性：

經(jīng)測定，試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。

人血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒

實驗過程:

1.試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中請 使用一次性的吸頭,避免交叉污染。

2.加樣:加樣或加試劑時，請注意在吸取標本/標準品，酶結合物或底物時，第yi個孔與最hou-一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育“時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品) 將控制在10分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。

3.孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā);洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài):同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。

4.洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響最hou的酶標儀讀數(shù)。

[說 明]

1.由于現(xiàn)有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量 技術風險。

2.最終的實驗結果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及 當時的實驗環(huán)境密切相關，請務必準備充足的標本備份。

3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。

4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最jia的檢測結果。

5.本公司只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。

6.使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質(zhì)的引入導致ELISA實驗結果偏差。

7.若樣本為細胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如:細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。

8.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗ti及捕獲抗ti不匹配，而不被檢測出。

常見問題解析：

1、試劑的選擇：選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的，但是在檢測之前還應該提前半個小時將試劑拿到常溫下進行解凍。

2、加樣中可能遇到的問題。

3、洗板時容易造成誤差。

4、顯色問題：使用了過期的顯色劑或者是顯色劑用過后放置時間太長，都有可能造成顯色劑不顯色。

5、終止反應：在加終止劑的時候由于傾倒速度快，產(chǎn)生氣泡，造成假陽性結果，所以在倒終止劑的時候要緩慢倒。

6、讀板：讀板的時候首先應該保證板的清潔干凈。

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