人巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒

ELISA檢測(cè)概述：

ELISA（酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析）是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗ti的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 由于抗原、抗ti的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。

實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測(cè)抗ti的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗ti夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。目前我們對(duì)客戶提供比較常用的ELISA雙抗ti夾心法及ELISA間接法服務(wù)

特點(diǎn)概述

1.專一性強(qiáng)。抗原與抗ti的免疫反應(yīng)是專一反應(yīng)， 而免疫酶技術(shù)以免疫反應(yīng)為基礎(chǔ),所檢測(cè)的對(duì)象是抗原(或抗ti)，使用的抗ti除標(biāo)記了酶以外，與普通抗ti的免疫反應(yīng)特性并無(wú)多大差別。

2.靈敏度高。由于抗ti聯(lián)結(jié)上了酶，因此，借助于酶與底物的顯色反應(yīng)，顯示抗原與抗ti的結(jié)合，大大提高了檢測(cè)的靈敏性,使檢測(cè)水平接近放射免疫測(cè)定法。

3.樣品易保存。經(jīng)過(guò)酶反應(yīng)顯示的有色產(chǎn)物大多比較穩(wěn)定，因此有利于樣品的保存。

4.結(jié)果易觀察。對(duì)檢測(cè)結(jié)果即可用肉眼觀察,又可用顯微鏡觀察,也可以用分光光度計(jì)進(jìn)行比色測(cè)定,還可用顯微鏡觀察。這是因?yàn)槟承┟阜磻?yīng)產(chǎn)物能使電子密度發(fā)生改變，從而引起被檢測(cè)物的顯示。

5.可以定量測(cè)定。溶液中的抗原物質(zhì)，應(yīng)用酶免吸附技術(shù)進(jìn)行比色測(cè)定,依據(jù)光密度值的變化，可以定量。預(yù)計(jì)用細(xì)胞分光光度計(jì)可對(duì)組織內(nèi)的抗原進(jìn)行免疫酶技術(shù)的定量測(cè)定。

6.可以大規(guī)模測(cè)定樣品。如有成千.上萬(wàn)份樣品需要進(jìn)行檢測(cè)，免疫酶技術(shù)都能在較短時(shí)間內(nèi)完成。

7.儀器和試劑簡(jiǎn)單。對(duì)免疫沒(méi)技術(shù)來(lái)說(shuō)，不需要熒光顯微鏡,也不需要測(cè)定放射性的特殊儀器,所用儀器及試劑均屬一般性儀器與試劑，普通實(shí)驗(yàn)室及生產(chǎn)應(yīng)用單位均易購(gòu)置

ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法：

1）血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3）細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。

試劑盒的儲(chǔ)存及有效期：

未開(kāi)封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存。請(qǐng)注意，收到試劑盒后請(qǐng)盡快將TMB 洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。

使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存，開(kāi)封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。

穩(wěn)定性：

經(jīng)測(cè)定，試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。

人巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒

試驗(yàn)原理

試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將生wu素標(biāo)記的抗ti同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。

試劑和樣本的控制方法:

一、試劑

1.試劑的選擇:國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn),已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證",每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的生產(chǎn)批號(hào),只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。

2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放置20-30 min后,再進(jìn)行測(cè)定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測(cè)定需求。

二、樣本

1.內(nèi)源性干擾因素:包括類因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;

類因子的控制方法:

①用F(ab)2替代完整的IgG;

②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;

③檢測(cè)抗原時(shí),可用2-巰ji乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解;

補(bǔ)體的控制方法:

①用EDTA稀釋標(biāo)本;

②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;

2.外源性干擾因素:包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或凝固不全等;

控制方法:采血時(shí)規(guī)范操作,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血;收集標(biāo)本時(shí)采用無(wú)菌試管,經(jīng)檢測(cè)后再低溫凍存;保存時(shí)間不宜過(guò)久,檢測(cè)時(shí)盡量采用新鮮標(biāo)本;對(duì)于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清。

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